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技術(shù)文章 / article
為什么STR鑒定對于ATCC細(xì)胞系來說很重要
原載自:www.tielongxhd6.cn[技術(shù)資料頻道] 2021-05-17 瀏覽次數(shù):1999
ATCC 成立于 1925 年,是大的生物資源中心,由美國 14 家生化、醫(yī)學(xué)類行業(yè)協(xié)會組成的理事會負(fù)責(zé)管理,是一家全球性、非盈利生物標(biāo)準(zhǔn)品資源中心。
進行細(xì)胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進行,這些細(xì)胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細(xì)胞庫(如美國?ATCC,American?Type?Culture?Collection)得來。據(jù)估計,15-20%的實驗室,實驗中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來的細(xì)胞系,或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大的威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此,很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細(xì)胞系進行鑒定,并對細(xì)胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。
現(xiàn)在很多機構(gòu)都已經(jīng)認(rèn)識到這個的重要性,ATCC和FDA,這些機構(gòu)要求對用于制藥領(lǐng)域的實驗中所使用的材料?—?諸如細(xì)胞系?—?應(yīng)該進行“身份鑒定”和純度測試。很多雜志也要求使用細(xì)胞系的文章提供STR指紋圖譜數(shù)據(jù)。
FDA建議研究人員在培養(yǎng)細(xì)胞的較早階段(細(xì)胞培養(yǎng)第一周)來鑒定細(xì)胞系的身份。細(xì)胞在被凍存前應(yīng)再一次進行鑒定;對于活躍生長的細(xì)胞,每兩個月應(yīng)鑒定一次;文獻發(fā)表前也應(yīng)對細(xì)胞系身份進行鑒定。
細(xì)胞如何運輸?收到細(xì)胞后如何處理?
從美國運輸過來的原裝 ATCC 細(xì)胞都是冰凍形式,采用干冰運輸?shù)姆绞?。在收到凍存?xì)胞后,很重要的一點是迅速復(fù)蘇。
如果做不到立即復(fù)蘇,需將細(xì)胞存儲在液氮中。請不要將細(xì)胞存放在 -80 ℃ 冰箱,這會使細(xì)胞存活率迅速下降。
使用什么培養(yǎng)基?
復(fù)蘇細(xì)胞時需要準(zhǔn)備合適的培養(yǎng)基,血清和細(xì)胞生長所需的添加劑。雖然大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長,但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時,細(xì)胞的性質(zhì)也會變化。
另外,有的培養(yǎng)基如 DMEM,各廠商提供產(chǎn)品雖然名稱相同,但成分也會有差異。為了保證細(xì)胞最大的復(fù)蘇率和維持細(xì)胞特性,建議購買細(xì)胞的時候,同時購買 ATCC 的培養(yǎng)基(見產(chǎn)品信息說明書和 ATCC 網(wǎng)站)。
收到細(xì)胞后為什么沒有說明書?
為了響應(yīng)環(huán)保號召,以及保證信息的快速更新。ATCC 細(xì)胞株寄送時沒有隨貨附帶紙質(zhì)版說明書。
ATCC細(xì)胞系說明書有關(guān)于細(xì)胞復(fù)蘇和傳代的詳細(xì)步驟。除說明書外,還有另外一份重要文件——COA(Certificate of Analysis)。COA 中包含具體批次信息,如每管細(xì)胞的數(shù)量,建議復(fù)蘇使用的培養(yǎng)基用量,已知細(xì)胞的傳代代次等重要信息。